№ | Слайд | Текст |
1 |
 |
ЛЕКЦИЯ 3 ГЕНОМ МИТОХОНДРИЙ РАСТЕНИЙ 1. Организация молекулмитохондриальной ДНК растений разных систематических групп 2.Изменчивость структуры молекул митохондриальной ДНК 3.Митохондриальные плазмиды 4.Гены митохондрий 5.Интроны митохондриальных генов. Гены интронов 6.Ядерные и пластидные ДНК-последовательности в митохондриальном геноме растений 7.Репликация митохондриального генома растений |
2 |
 |
Обнаружение митохондриальной ДНК в клеткахЭлектронно-микроскопический метод: нити, дающие окрашивание с ДНК-красителями которые разрушались нуклеазами, увидеть в митохондриях удалось в начале 60-х годов Оказалось, что мтДНК основных систематических групп эукариот: простейших, растений, грибов животных значительно отличаются друг от друга по структуре |
3 |
 |
Параметры мтДНК растенийМт ДНК высших растений – менее 1% от всей ДНК клетки, очень редко достигает 10-15% (гипокотиль дыни). Плавучая плотность ДНК мт растений колеблется незначительно: 1,705-1,707, что соответствует 48% ГЦ-пар. Размеры мт геномов колеблются очень сильно: 180-2500 тпн. В семействе тыквенных (Сucurbitaceae) 330 тпн 2500 тпн Дыня Арбуз |
4 |
 |
Виды молекул митохондриальной ДНК: большие «геномные» кольца (крайнередко) система меньших колец разных длин линейные молекулы катенированные кольца розеткообразные молекулы: до 50 петель с одним ДНК центром (подобие нуклеоидов пластид) |
5 |
 |
10 сигма-подобных структур мтДНК Chenopodium albumСтрелки указывают места соединения кольца и хвоста (A) кольцо 3 kb, хвост 28 kb; (b) кольцо 4.4 kb, хвост 9 kb; (c) кольцо 6.5 kb, хвост 0.2 kb; (d) кольцо 7.4 kb, хвост 6.2 kb; (e) кольцо 8.9 kb, хвост 0.5 kb; (f) кольцо 11.6 kb, хвост 7.9 kb; (g) кольцо 20 kb, хвост 65.5 kb; (h) кольцо 51 kb, хвост 26.9 kb; (i) кольцо 61.1 kb, хвост 6.1 kb; (j) кольцо 128 kb, хвост 36.5 kb. |
6 |
 |
Сигма-подобные структуры мтДНК Chenopodium albumХ10 |
7 |
 |
Размерные классы, обнаруженные при анализе 8,000 молекул мтДНКChenopodium album Проанализирована 291 сигма-подобная молекула |
8 |
 |
Большие рекомбинационные повторы - особенность митохондриальной ДНКрастений Модель структуры митохондриального генома Brassica campestris 218 kb 83 kb 135 kb Два малых кольца – результат рекомбинации по двум повторам основного кольца Полный геном – большое кольцо |
9 |
 |
Recombination in mtDNA of Arabidopsis thalianaThe mtDNA contains a direct repeat (I) and an inverse repeat (II). |
10 |
 |
Рекомбинационные повторы обнаружены почти во всех изученныхмитохондриальных геномах У пшеницы их 10 (!), у кукурузы - 5 прямых и 1 инвертированный При таком количестве повторов число субгеномных колец может быть огромным. |
11 |
 |
Рекомбинация молекул мтДНК пшеницы[A]: образование изомера –рекомбинация по инвертированному повтору ( IR ) copy-1 и соpy -2. [B] и [C]: образование двух комплементарных субгеномных молекул при рекомбинации по прямому повтору ( DR ) copy-2 и -3, and и две копии R5 [D]: образование аберрантной молекулы MC, имеющей лишнюю копию кластера copy-3/2 и R5 повтора при рекомбинации по повтору R6 C B A D |
12 |
 |
Не все повторяющиеся последовательности способны рекомбинироватьСобственных ферментов-рекомбиназ эти последовательности не кодируют ??? Чем отличаются рекомбинирующие повторы от нерекомбинирующих, неясно |
13 |
 |
Размеры больших повторовДля большинства повторов: – от 1000 пн до 10000пн. Наименьший из известных больших повторов - 266 пн. Необычно большие повторы: – у ЦМС- формы петунии 252 000 пн - у F- ревертанта ЦМС-Т кукурузы 165 000 пн. |
14 |
 |
Малые повторы в митохондриальных ДНК растенийРазмер – от 6-7 до нескольких сот нуклеотидов ??? Происхождение малых повторов неясно Малые повторы участвуют в редких рекомбинациях, что иногда приводит к образованию больших повторов Показано, что при изменении внешних условий и при культивировании в пробирке, митохондрии могут дестабилизироваться, часть генома при этом утрачивается или преобразуется, что может иметь адаптационный смысл |
15 |
 |
Модель образования большого повтора с помощью малых повторов в мтДНКрастений R1, R2 – малые повторы Большие повторы Новая молекула с большим рекомб. повтором и большой делецией I III II А R1 R2 R1 R2 Исходная основная кольцевая молекула В R2 R1 R1 R2 R2 R1 R1 D R2 R2 R2 |
16 |
 |
Модель рекомбинации мтДНК табака Две субгеномные молекулы, C и D,образуются в результате рекомбинации по повторам (в черных участках P кольца). SacI фрагменты: P: 19- и 5.4-kb rec1 C и D: 11.8- и 12.6-kb. Светло-серые фрагменты – 3 повторяющиеся последовательности CMSII мт геном содержит только C молекулы |
17 |
 |
Митохондриальные плазмиды – малые линейные и кольцевые ДНК- и РНК-молекулы, не гомологичные геномной мтДНК. . Размер мт плазмид колеблется от 1000 до 30000пн. Митохондриальная плазмида mp1 of Chenopodium album – разные структурные модификации |
18 |
 |
Электронные фото различных молекул митохондриальных плазмид ( mp1 )Chenopodium album (a - g) Типичные сигма-подобные структуры mp1. (a) Двунитчатый кольцевой мономер (1.3 kb) с однонитевым хвостом (170 пн); (b) Двунитчатый кольцевой мономер с однонитевым хвостом 400 п.о.; (c - g) двунитчатые кольца 1.3 kb с двунитевым хвостом длиной 0.1 kb (c), 0.6 kb (d), 0.9 kb (e), 1.2 kb (f), and 3.4 kb (g). |
19 |
 |
Плазмиды в митохондриях найдены у многих культурных растений –кукурузы, сорго, бобов и др. Плазмиды, скорее всего, произошли из других клеточных геномов и, возможно, из других организмов ??? |
20 |
 |
Три основные категории плазмид в митохондриях растений : кольцевыеДНК-плазмиды линейные ДНК- плазмиды, РНК-плазмиды. Плазмид у одного вида может быть несколько типов – у риса их четыре Плазмиды могут утрачиваться без каких-то видимых последствий для растений Свекла Сорго Рис Днк Фасоль Кукуруза Подсолнечник |
21 |
 |
Кольцевые плазмидоподобные молекулы в митохондриальном геноме риса |
22 |
 |
Линейные ДНК-плазмиды – уникальная группа репликоновИмеют высокий процентАТ-пар и терминальные инвертированные повторы У кукурузы – два типа линейных плазмид (S, R) Линейные плазмиды способны интегрироваться в митохондриальный геном ! Некоторые последовательности линейных плазмид гомологичны вирусным РНК-полимеразам. |
23 |
 |
РНК-плазмиды - наименее изученная группа Обнаружены у риса, кукурузы,Brassica, сахарной свеклы. Самые крупные (18 тпн) Четыре типа РНК-плазмид найдено у кукурузы – два типа двунитчатых и два типа однонитчатых. Репликация РНК-плазмид не подавлялась актиномицином Д, что указывает на участие в процессе РНК-полимеразы вирусного типа ??? Происхождение РНК-плазмид неясно. Возможно, они являются реликтами прошлых инфекций, в результате чего сохранился геном патогена |
24 |
 |
Размеры секвенированных митохондриальных геномов растенийMarchantia polymorpha 186609 п.Н. 66 генов (94 ORF) beta vulgaris 368801 «» 59 генов arabidopsis thaliana 366924 «» 57 генов oryza sativa 490520 «» brassica napus 221 853 «» 54 гена zea mays 569630 «» 58 генов (121 ORF) triticum aestivum 452528 «» 55 генов nicotiana tabacum 430597 «» 60 генов Самые большие ДНК молекулы - не самые генетически насыщенные |
25 |
 |
Митохондриальные геномы низших растений имеют меньшие размеры, чем упокрытосеменных С выходом растений на сушу произошло увеличение размера митохондриальных геномов, в основном за счет межгенных участков |
26 |
 |
Гены митохондрий составляют меньшую часть мтДНК молекулы, ониконсервативны между родственными видами Митохондриальный геном Arabidopsis Неустановленные последовательности не имеют явного сходства ни с одной идентифицированной последовательностью в базах данных. Интроны - исключительно группы II. ОРС >100 п.н. Не установлена функция тРНК рРНК 10.2% Белок-кодирующие гены Рекомбинационные повторы 2.9% 2.2% Ядерно-мт гомологичн последоват. 4% Интроны 1.2% 3.9% ядерная ДНК пластидная ДНК 9% Другие повторы |
27 |
 |
|
28 |
 |
Митохондриальная ДНК рапсаБольшая часть генома изменчива, не кодирует белков и часто уникальна для определенного вида растений |
29 |
 |
К началу 2009 года в базе GOBASE http://megasunbch.umontreal.ca/ogmp/projects/other/mtcomp.html Представлены полные сиквенсы 13-ти митохондриальных геномов высших растений, относящихся к 8 видам Всего полных сиквенсов органельных ДНК на начало 2009 года - 1898 Общее число видов, для которых эти сиквенсы получены - 1283 |
30 |
 |
Классификация последовательностей мтДНК пшеницыПрактически все уникальные последовательности мтДНК пшеницы относятся к некодирующим областям Категория Кол-во Общий размер (bp) Пропорция(%) Полный геном — 452 528 100.0 Гены, включая интроны 76 71 848 15.9 Orfs (более 300 bp), включая входящие в повторы 179 75 465 16.7 Повторяющиеся пос-ти размером более 100 bp 26 68 960 15.2 Хлоропластные последовательности 47 13 455 3.0 Ретро элементы 5 805 0.2 Уникальные (более 100 bp), которых нет у риса и кукурузы 277 257 762 57.0 |
31 |
 |
Рибосомы митохондрий крупнее рибосом пластид:Рибосомальные РНК гены: 26S, 18S и 5S, у кукурузы еще 4,5S. 18-5S сцеплены в один кластер и удалены от 26S. Ген 5s у грибов и животных в митохондриальном геноме отсутствует |
32 |
 |
Набор тРНК, кодируемых митохондриальным геномом, значительноразличается у разных видов растений Около трети митохондриально кодируемых тРНК генов в действительности произошли из хлоропластных генов, интегрированных в митохондриальный геном. н.о.= не определялось. ??? Каков механизм импорта тРНК молекул через мембрану? Почему одни молекулы проходят, другие нет? Кто выполняет роль переносчиков? 29 12 25 Н.О. 11 12 9 10 0 6 5 Н.О. 6 5 6 6 Ядро 2 13 11 >8 Н.О. Н.О. >3 Н.О. Источник Митохондрии Хлоропласт Marchantia polymorpha Arabidopsis thaliana Solanum tuberosum Vicia faba Helianthus annuus Petunia hybrida Triticum aestivum Zea mays |
33 |
 |
Генов рибосомальных белков в митохондриальной ДНК намного меньше, чемв хлоропластной В мтДНК маршанции их 16, у арабидопсиса – 8. Гены субъединиц комплекса дыхат. цепи: и 25 у маршанции, 18 у арабидопсиса Трансляционный аппарат Гены Выделенные жирным шрифтом гены найдены и у маршанции, и у арабидопсиса рибосомальная РНК rrn5, rrn18, rrn26 Рибосомальные белки Малая субъединица rps1, rps3, rps4, rps7, rps8, rps12, rps13, rps14, rps19 Большая субъединица rpl2, rpl5, rpl6, rp116 транспортные РНК Не менее 16 Субъединицы комплекса дыхательной цепи Nadh-дегидрогеназа (компл. I) nad1, nad2, nad3, nad4, nad4l, nad5, nad6, nad7, nad9 Cукцинатдегидрогеназа (компл. Ii) sdh2b, sdh3c, sdh4 Цитохром b (компл. Iii) cytb Цитохром c оксидаза (компл. Iv) cox1, cox2, cox3 ATФ синтаза atp1, atp6, atp 8, atp9 Биогенез цитохрома с Ccb206,ccb256 , ссb453, ccb 382, ccb203 Постоянные по составу открытые рамки считывания orf25, mat-rd |
34 |
 |
В митохондриальном геноме арабидопсиса обнаружено более 150 ORF,состоящих из 100 и более пар нуклеотидов Часть из них – «обломки» генов, другая часть – гены, функция которых пока не установлена Псевдогены 2 типа: 1 Дегенерировавшие копии генов, не имеющие интактной копии в мт геноме – например ген ФЕН тРНК. 2 Дегенерировавшие копии генов, имеющие полноценные копии в мт геноме (химерные гены при ЦМС) |
35 |
 |
Интроны митохондриальных генов растений К 2000 году в мтДНК разныхрастений найдено 100 интронов Интроны составляют от 9% до 20% геномной последовательности мтДНК В мт ДНК арабидопсиса их 23 Длина их колеблется от 485 до 4000 пн Самый маленький интрон в митохондриальной ДНК – 389 пн. |
36 |
 |
Вторичная структура интрона coxII у пшеницыИнтроны группы II осуществляют самосплайсинг (рибозимы) они вероятно могут выполнять роль мобильных генетических элементов |
37 |
 |
Новые интроны появляются скорее всего дупликацией существующих и ихвнедрением в новые участки генома Поэтому столь велико сходство между интронами в разных генах Некоторым интронам более 400млн лет! Они сформировались еще до разделения растений на высшие и низшие 25% всех интронов содержит ОRF ( ген mat-r) Он отличается неканоническим инициирующим кодоном – GGG. Функция матураз - вырезание интрона из пре-мРНК. |
38 |
 |
Ядерные и пластидные последовательности в митохондриальном геноме Уарабидопсиса 15 тпн (5% от всего генома мт) - ядерные Большая часть этих последовательностей – мобильные генетические элементы, в основном ретротранспозоны. Также имеются последовательности, сходные с транспозонами бактерий и животных (межвидовой перенос генетических элементов??? ). Мало данных, так нет полных сиквенсов ядерных геномов растений. Арабидопсис: 1,2% мтДНК – пластидные последовательности Пшеница – 3% мтДНК -пластидные последовательности У кукурузы в мтДНК интегрирован фрагмент пластидной ДНК размером 12тпн. В митохондриях растений функционируют перенесенные из пластид гены тРНК |
39 |
 |
Вирусные последовательности в митохондриальном геноме арабидопсис –две ORF весьма похожи на РНК-зависимые РНК-полимеразы, типичные для РНК- вирусов. Особенно они похожи на РНК полимеразы грибов, патогенных для растений. По-видимому, именно таков был путь переноса: вирусы грибы растения –хозяева. Механизм интеграции: ??? Cкорее всего, через обратную транскрипцию образуется ДНК-копия |
40 |
 |
Итак, митохондриальный геном растений: содержит 50-60 генов крайнеизменчив по структуре, белок-кодирующие гены и РНК гены составляют менее 20% имеет много не идентифицированных ORF функция половины мтДНК молекулы не выяснена необычно большие молекулы мтДНК за счет интронов, повторяющихся последовательностей, ядерных, пластидных и вирусных фрагментов некодирующие участки достигают длины 57 тпн. гены, обеспечивающие транскрипцию, процессинг и трансляцию мт генома, локализованы в ядре ОРС >100 п.н. 9% |
«Разные у низших растений» |