Азот
<<  Получение правовой охраны товарного знака в рамках национальной и международной регистрации Подгруппа углерода и азота  >>
Иммобилизованные в полимерные гели ферментные системы: получение и
Иммобилизованные в полимерные гели ферментные системы: получение и
Тест-методы: Химические; Биологические
Тест-методы: Химические; Биологические
3
3
4
4
Цель: Разработка стабильных иммобилизованных препаратов на основе
Цель: Разработка стабильных иммобилизованных препаратов на основе
Материалы и методы
Материалы и методы
Система NADH:FMN-оксидоредуктаза – люцифераза
Система NADH:FMN-оксидоредуктаза – люцифераза
Измеряемые параметры биолюминесценции: Максимальная интенсивность
Измеряемые параметры биолюминесценции: Максимальная интенсивность
Условия экспериментов
Условия экспериментов
Рисунок 1 – Интенсивность свечения иммобилизованной совместно со
Рисунок 1 – Интенсивность свечения иммобилизованной совместно со
Таблица 2 – Действие ряда токсических веществ на иммобилизованную
Таблица 2 – Действие ряда токсических веществ на иммобилизованную
Бутирилхолинэстераза (BChE)
Бутирилхолинэстераза (BChE)
Активность бутирилхолинэстеразы = скорость гидролиза бутирилхолина
Активность бутирилхолинэстеразы = скорость гидролиза бутирилхолина
Результаты
Результаты
15
15
АТФ-зависимая люцифераза
АТФ-зависимая люцифераза
Выводы
Выводы

Презентация на тему: «Методы анализа токсических веществ». Автор: . Файл: «Методы анализа токсических веществ.ppt». Размер zip-архива: 1256 КБ.

Методы анализа токсических веществ

содержание презентации «Методы анализа токсических веществ.ppt»
СлайдТекст
1 Иммобилизованные в полимерные гели ферментные системы: получение и

Иммобилизованные в полимерные гели ферментные системы: получение и

применение

Лоншакова Виктория Ивановна Научный руководитель: Есимбекова Е. Н. к.б.н., н.с. ИБ СО РАН

2 Тест-методы: Химические; Биологические

Тест-методы: Химические; Биологические

Преимущества биологических методов анализа: интегральность;

Токсические вещества: соли тяжелых металлов; фенолы; хиноны; фосфорорганические соединения (ФОС). Бактериальное заражение

2

3 3

3

4 4

4

5 Цель: Разработка стабильных иммобилизованных препаратов на основе

Цель: Разработка стабильных иммобилизованных препаратов на основе

ферментных систем для проведения биотестирования Задачи: Создание методики иммобилизации ферментных систем (на основе бутирилхолинэстеразы, АТФ-зависимой люциферазы, системы НАДН:ФМН-оксидоредуктаза-люцифераза-алкогольдегидрогеназа) в крахмальный и желатиновый гели; Установить механизмы (способы) регулирования чувствительности иммобилизованных реагентов к действию токсических веществ; Разработать способ биотестирования токсичности водных экосистем на основе иммобилизованных реагентов.

5

6 Материалы и методы

Материалы и методы

6

7 Система NADH:FMN-оксидоредуктаза – люцифераза

Система NADH:FMN-оксидоредуктаза – люцифераза

Nadh:fmn-оксидоредуктаза (R) NAD (P) H + FMN + H+ NAD (P)+ + FMNH2 люцифераза (L) RCHO + FMNH2 + O2 RCOOH + FMN + H2O + свет

Ферментативные реагенты для биолюминесцентного анализа

7

8 Измеряемые параметры биолюминесценции: Максимальная интенсивность

Измеряемые параметры биолюминесценции: Максимальная интенсивность

свечения (Imax) Константа спада свечения (kсп) Время выхода свечения на максимальный уровень (Tmax)

Реакционная смесь: иммобилизованный реагент 300 мкл дистиллированной воды 10 мкл 5?10-4 М раствора FMN

8

9 Условия экспериментов

Условия экспериментов

Остаточная интенсивность свечения: (Ii/I0)?100%, Ii – Iмакс опытного образца I0 – Iмакс контрольного образца

Исследуемые характеристики иммобилизованных реагентов

Параметры биолюминесценции реагентов через 3 дня после его приготовления и при хранении в течение 6 месяцев (40С)

Чувствительность к действию токсических веществ (EC50)

Выбор реагента, наиболее чувствительного к действию CuSO4 и бензохинона (концентрации в реакционной смеси составляли 4?10-6 М и 5?10-7 М соответственно)

Чувствительность к действию рядов модельных токсических веществ

Хиноны (нафтохинон, тимохинон, толухинон)

Фенолы (гидрохинон, монофенол, пирокатехин)

Соли тяжелых металлов (CuSO4, CoCl2, CrCl2)

9

10 Рисунок 1 – Интенсивность свечения иммобилизованной совместно со

Рисунок 1 – Интенсивность свечения иммобилизованной совместно со

стабилизаторами биферментной системы (контрольный раствор - дистиллированная вода)

10

11 Таблица 2 – Действие ряда токсических веществ на иммобилизованную

Таблица 2 – Действие ряда токсических веществ на иммобилизованную

биферментную систему

Таблица 3 – Константы спада свечения реагента в зависимости от концентрации токсических веществ

Класс вещества

Класс вещества

Действующее вещество

Действующее вещество

ЕС50, мг/л

ЕС50, мг/л

Действующее вещество

Действующее вещество

Концентрация, мг/л

Концентрация, мг/л

K сп, мин-1

K сп, мин-1

Контроль

ДТТ (100мкМ)

Контроль

ДТТ (100 мкМ)

Соли

Соли

Соли

CuSO4?5H2O (ПДК 1 мг/л)

10

16

Контроль

0,26

0,16

CuSO4?5H2O

CuSO4?5H2O

CuSO4?5H2O

CuSO4?5H2O

0,025

0,18

0,24

CrCl2?6 H2O (ПДК 0,05 мг/л)

479

586

1,25

0,20

0,17

6,24

0,23

0,26

HgCl2 (ПДК 1 мг/л)

0,62

0,73

24,9

0,66

0,53

Фенолы

Фенолы

Фенолы

Пирокатехин (ПДК 0,1 мг/л)

84,8

148,4

Пирокатехин

Пирокатехин

Пирокатехин

Пирокатехин

0,011

0,15

0,09

0,053

0,11

0,10

Резорцин (ПДК 0,004 мг/л)

1760

1765

0,106

0,17

0,10

Гидрохинон (ПДК 0,2 мг/л)

3,06

4,72

0,318

0,20

0,11

Хиноны

Хиноны

Хиноны

Хиноны

Бензохинон (ПДК 0,1 мг/л)

0,002

0,003

Тимохинон

Тимохинон

Тимохинон

Тимохинон

0,2?10-6

0,27

0,16

1?10-6

0,38

0,28

Толухинон

0,00008

0,00008

5?10-6

0,24

0,17

Тимохинон

0,00005

0,0007

1?10-5

0,32

0,18

Нафтохинон (ПДК 0,25 мг/л)

0,001

0,0016

11

12 Бутирилхолинэстераза (BChE)

Бутирилхолинэстераза (BChE)

12

13 Активность бутирилхолинэстеразы = скорость гидролиза бутирилхолина

Активность бутирилхолинэстеразы = скорость гидролиза бутирилхолина

, Где D – оптическая плотность (? = 412 нм); t – время.

Реакционная смесь: 1 диск реагента; 2 мл 0,05 М калий-фосфатного буфера pH = 8,1; 100 мкл S-BChI 120·10-3 М

13

14 Результаты

Результаты

Таблица 1 – Значения коэффициента угла наклона

Рисунок 1 – Зависимость изменения оптической плотности от времени в реакционных смесях с различным содержанием бутирилхолинэстеразы

14

Количество ед. активности BChE, U

Коэффициент наклона

0,130

0,189

0,120

0,112

0,100

0,074

0,090

0,057

0,064

0,019

15 15

15

16 АТФ-зависимая люцифераза

АТФ-зависимая люцифераза

16

17 Выводы

Выводы

Наибольший стабилизирующий эффект при сохранении чувствительности к действию токсических веществ наблюдается при внесении в иммобилизованный реагент на основе биферментной системы NADH:FMN-оксидоредуктаза – люцифераза 100 мкМ ДТТ. Иммобилизация BChE совместно с индикатором на тиольную группу не оказывает влияния на активность фермента.

17

«Методы анализа токсических веществ»
http://900igr.net/prezentacija/khimija/metody-analiza-toksicheskikh-veschestv-219610.html
cсылка на страницу
Урок

Химия

65 тем
Слайды
900igr.net > Презентации по химии > Азот > Методы анализа токсических веществ