Презентация на тему «ИФА и ИХА тест-системы для диагностики инфекционных и паразитарных заболеваний в ветеринарии»

ИФА и ИХА тест-системы для диагностики инфекционных и паразитарных

заболеваний в ветеринарии. Современные методы, их особенности и различия.

Островский М.В. к.в.н. начальник отдела ветеринарии ЗАО «Биоград».

В современной ветеринарной практике большую роль играет лабораторная

диагностика, как один из основных инструментов постановки диагноза при инфекционных и паразитарных заболеваниях

Быстрые тесты на заболевания

Необходимость в любых условиях оперативно проводить исследования дала толчок появлению быстрых тестов, Современные быстрые тесты позволяют Поставить анализ без дорогостоящего оборудования Получить результат анализа сразу на приеме либо в течение часа Не требуют обязательной отправки в лабораторию Применяются врачами как на приеме так и на выездах и в полевых условиях

Принципы работы быстрых тестов

Иммунологический метод анализа основан на реакции между антигеном и соответствующим ему антителом (реакция антиген – антитело) Антиген - это вещество, которое чужеродное для организма животного и которое может запустить иммунную систему (защитную реакцию). Антитела - это белки, которые выделяются клетками организма животного при внедрении в него антигена

Типы быстрых тестов

В настоящее время применяемые в ветеринарии быстрые тесты на заболевания подразделяются на: Иммунохроматографические (ИХА) : много производителей Иммуноферментные (ИФА): Idexx SNAP, Biogal ImmunoComb

Экспресс-тесты – ИХА: внешний вид

Что такое экспресс-тест ИХА

В основе теста лежит метод иммунохроматографического анализа (ИХА). В результате теста происходит классическая реакция "антиген-антитело" с образованием иммунных комплексов, которые можно визуально обнаружить на тест-полоске. Принцип действия состоит в том, что при погружении тест-полоски в биологическую жидкость (или другой жидкий образец), она начинает мигрировать вдоль полоски по принципу тонкослойной хроматографии. Вместе с ней движутся нанесенные на нижнюю часть тест-полоски меченые специфические антитела, которые аффинно (прочно и родственно) связываются с анализируемым веществом.

Основными преимуществами использования иммунохроматографических тестов

являются:

Быстрота: - Одношаговая процедура с получением результата обычно в течение 10-15-20 минут. Удобство: - Простой в использовании и легкий в прочтении результатов

Однако иммунохроматографические тест-полоски не лишены недостатков

Касается это, в первую очередь, надежности и чувствительности тестов. Надежность и чувствительность зависит, во-первых, от качества используемых в тесте реагентов и, во-вторых, от концентрации антигена в биоматериале. Качество используемых реагентов зависит от способов их получения, очистки и фиксации на полоске. Концентрация антигена – от стадии заболевания и количества биоматериала. Количество биоматериала особенно важно при использовании цельной крови. Cущественную роль играет гематокрит, т.е. соотношение плазмы и форменных элементов. При высоком гематокрите снижается доля элементов антигена из плазмы по сравнению с форменными элементами

Кроме того:

ИХА-тесты обеспечивают только качественный результат (да - нет), измерение концентрации невозможно. При некоторых заболеваниях, они могут быть малоинформативными (например FIP). Экспресс-тесты (антигенные) «работают» только в течение ~ 3-7 дней после заражения (только при первоначальном воздействии антигена на организм животного) ( вирусные заболевания). Минимальная определяемая ИХА концентрация антигена или антител сильно выше, чем у ИФА, что может давать «ложноотрицательный» результат на ранней стадии, поскольку уровень антигена/антител может быть слишком низким, чтобы обнаружить заболевание на ранней стадии. Большой процент «ложноположительных» результатов, что мешает при исследовании животных на вирусоносительство.

Что такое ИФА-анализ (ELISA)

Основной отличительной чертой иммуноферментного анализа является то, что комплекс «антиген-антитело» выявляется с помощью субстрата, который расщепляется ферментом с появлением окрашивания (ферментативное окрашивание). При ферментативном окрашивании для достижения окраски требуется меньшее количество комплексов антиген-антитело, так как каталитические свойства ферментов позволяют действовать им в качестве усилителей: одна молекула фермента может способствовать образованию более 1•105 молекул продукта каталитической реакции в минуту, что обуславливает высокую чувствительность ИФА.

Основными преимуществами использования ИФА- тестов являются:

Иммуноферментный анализ – более надежный и чувствительный метод для поиска антител и антигенов и оценки их концентрации. Обеспечивает не только качественный, но и количественный результат. Определяет относительный уровень титра - диагностирует болезнь, на гораздо более низком уровне титра, чем положительное пороговое значение в ИХА - тестах. Позволяет подтверждать подозрительные случаи заболевания, за которыми в дальнейшем может быть изменение титра. ИФА – анализ более точный в определении, он позволяет не только диагностировать заболевание , но и определить его стадию и отследить динамику развития болезни.

Однако, у классического ИФА - анализа есть свои сложности и недостатки

Длительность и сложность постановки по сравнению с ИХА – методом и невозможность количественного учета результатов без специального оборудования. Необходимо большое количество образцов (8-96) для постановки анализа. Требуется специальная подготовка специалистов Высокая стоимость оборудования для оснащения лаборатории.

Преимущество ИХА -тестов с классическим ИФА:

ИХА -тест

Классический ИФА

1. Простой 2. Портативный - удобен для «полевых» исследований.

Требует аппарата для считывания результатов ИФА.

Определяет до 3 инфекций в 1 анализе

Один результат на лунку планшета

Нужно небольшое количество образцов.

Необходимо большое количество образцов.

Быстрый срок выполнения анализа.

Более длительный срок выполнения анализа.

Выполняется непосредственно ветврачом в клинике или на вызове.

Выполняется специалистом в лаборатории.

Преимущества классического ИФА Сравнение с ИХА тестами

Классический ИФА Обеспечивает количественный результат. Точный и надежный. Определяет относительный уровень титра - диагностирует болезнь на гораздо более низком уровне титра, чем положительное пороговое значение у ИХА- тестов. Может подтверждать подозрительные случаи заболевания, за которыми в дальнейшем может быть изменение титра. Более точный в определении, не только если, но также и до какой степени животное заражено.

ИХА тесты Обеспечивает только качественный результат (даёт ответ только да/нет). Положительное пороговое значение для заболевания может давать «ложноотрицательный» результат, поскольку уровень антигена/антител может быть слишком низким, чтобы обнаружить заболевание на ранней стадии. Не даёт возможности определять стадию болезни и динамику её развития.

ImmunoComb®

Подведем итоги:

Любой Ветеринарный врач ставит диагноз на основании анамнеза и клинических признаков, которые могут изменяться от легких до тяжелых. При необходимости, в дополнении к ним, делаются анализы крови. А так же кала, мочи и др. в зависимости от предполагаемого заболевания. Иммунологические исследования помогут ветеринарному врачу получить информацию об иммунном статусе животного. Они либо подтвердят либо опровергнут предполагаемый диагноз, а так же могут помочь различить (отдифференцировать) одно заболевание от другого заболевания, инфекционного или неинфекционного характера. Не бывает правильных или неправильных тестов. Всё зависит от того, какой случай рассматривается у животного (больно оно или же здорово) и то, какой ответ (для каких целей ставился тест) необходимо получить при его постановке.

Спасибо за внимание