Презентация на тему «Иммуночипы – новый формат тест-систем для серологической диагностики инфекционных заболеваний» |
| Инфекционные заболевания | ||
| << Внеторакальный туберкулез | Возбудители туберкулеза >> |
Презентация на тему: «Иммуночипы – новый формат тест-систем для серологической диагностики инфекционных заболеваний». Автор: . Файл: «Иммуночипы – новый формат тест-систем для серологической диагностики инфекционных заболеваний.ppt». Размер zip-архива: 4702 КБ.
Иммуночипы – новый формат тест-систем для серологической диагностики инфекционных заболеваний
содержание презентации «Иммуночипы – новый формат тест-систем для серологической диагностики инфекционных заболеваний.ppt»| № | Слайд | Текст |
| 1 |  |
Иммуночипы – новый формат тест-систем для серологической диагностикиинфекционных заболеваний Чеканова Т.А., Маркелов М.Л., Пудова Л.А., Кирдяшкина Н.П., Гоптарь И.А., Судьина А.С., Андрюшина Т.А., Шипулин Г.А. ФБУН «Центральный НИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора |
| 2 |  |
Почему формат иммуночипаРазработка тест-систем в формате иммуночипа для диагностики инфекционных, аллергических и аутоиммунных заболеваний |
| 3 |  |
-+ Ифа vs Невозможно получить результаты по нескольким маркерам заболевания в одном анализе (различные протоколы, различные наборы), высокая себестоимость для комплексной диагностики (несколько маркеров) Широко используется в клинической практике, доступное оборудование, разумная цена для единичного анализа Иммуночип Ифа |
| 4 |  |
-+ Иммуноблот Невозможно получить результаты по нескольким инфекциям за один анализ (различные наборы), очень высокая цена анализа, субъективная интерпретация результатов Широко распространен в клинической практике, не нуждается в специализированном оборудовании Иммуночип Иммуноблот + + VS |
| 5 |  |
+- Технологии не для каждой лаборатории Evidence (RANDOX) BioPlex (BIO-RAD) Автоматическое процессирование Мультиплексность анализа (до 500 параметров) Автоматическое процессирование Мультиплексность анализа (до 500 параметров) Очень дорогие тест-системы и оборудование Дорогое техническое обслуживание |
| 6 |  |
В основу современного алгоритма серологической диагностики заложенанеобходимость проведения повторного тестирования для верификации результатов анализа |
| 7 |  |
+= Иммуночип – одноэтапный тест для выявления большого числа значимых биологических маркеров заболеваний, высокая информативность, возможность сочетания скрининга и подтверждения в одном формате сопоставимый (или >) по чувствительности с ИФА, а по специфичности с иммуноблотом |
| 8 |  |
Принципиальное отличие биочипов – возможность выявления в одноманализе множества маркеров 15 Цитокинов |
| 9 |  |
Аллергочип ImmunoCAP ISAC IgEОбщее время проведения реакции на чипе – около 5 часов Минимальное количество образца – 20 мкл на 103 аллергена Простота постановки |
| 10 |  |
|
| 11 |  |
Новая технология бесконтактной микропечати с помощью современныхнаноплоттеров Позволяют печатать на слайды или дно лунок планшетов |
| 12 |  |
1 чип (слайд) = 1 образец1 слайд = 16 образцов, 16 Х 4 = 64 образца 1 планшет = 96 образцов |
| 13 |  |
Иммуносорбенты для планарных чипов высокой плотности – активированныемикроскопные слайды и полистироловые планшеты Флуоресцентный профиль эррея на альдегидном слайде Эррей – лунка планшета |
| 14 |  |
Детекция антител разных классов в одной постановке в одном эррееКАНАЛ Cy5 (антитела IgG) КАНАЛ Cy3 (антитела IgM) |
| 15 |  |
Себестоимость анализа при использовании разных серологических методовЧисло анализируемых инфекций (количество маркеров на одну инфекцию = 5) |
| 16 |  |
Принципы размещения антигенов и антител на одном иммуночипеМикроорганизмы, имеющие перекрестно-реагирующие антигены Микроорганизмы, имеющие одинаковые пути передачи Микроорганизмы, вызывающие сходную патологию Микроорганизмы, эндемичные для региона, в котором планируется использовать иммуночип Инфекции, вызываемые патогенными спирохетами Трансфузион-ные инфекции АФС, ToRCH-инфекции Арбовирусные инфекции |
| 17 |  |
Схема проведения анализа с помощью иммуночипаОтмывка Разведение сывороток Инкубация с образцом, 370С Детекция Инкубация c коньюгатом, 370С Отмывка |
| 18 |  |
Тест-системы в формате иммуночипов, разрабатываемые в цнииэ |
| 19 |  |
Дизайн эррея иммуночипа для серодиагностики Лайм-боррелиоза- + Р100 B.Gar. Р100 B.Afz VlsE B.gar. VlsE B.afz p58 B.afz. p41 B.gar p41 B.afz Р100 B.Gar. Р100 B.Afz VlsE B.gar. VlsE B.afz p58 B.afz. p41 B.gar p41 B.afz p39 B.afz BBK32 B.gar BBK32 B.afz OspC B.afz OspC B.afz p17 B.gar p17 B.afz p39 B.afz BBK32 B.gar BBK32 B.afz OspC B.afz OspC B.afz p17 B.gar p17 B.afz Вспомогательные контроли (титрование IgG/IgM человека) Вспомогательные контроли (титрование IgG/IgM человека) Вспомогательные контроли (титрование IgG/IgM человека) Вспомогательные контроли (титрование IgG/IgM человека) Вспомогательные контроли (титрование IgG/IgM человека) Вспомогательные контроли (титрование IgG/IgM человека) Вспомогательные контроли (титрование IgG/IgM человека) Вспомогательные контроли в титровании (титрование IgG/IgM человека) Вспомогательные контроли в титровании (титрование IgG/IgM человека) Вспомогательные контроли в титровании (титрование IgG/IgM человека) Вспомогательные контроли в титровании (титрование IgG/IgM человека) Вспомогательные контроли в титровании (титрование IgG/IgM человека) Вспомогательные контроли в титровании (титрование IgG/IgM человека) Вспомогательные контроли в титровании (титрование IgG/IgM человека) Вспомогательные контроли в титровании (титрование анти- IgG/IgM человека) Вспомогательные контроли в титровании (титрование анти- IgG/IgM человека) Вспомогательные контроли в титровании (титрование анти- IgG/IgM человека) Вспомогательные контроли в титровании (титрование анти- IgG/IgM человека) Вспомогательные контроли в титровании (титрование анти- IgG/IgM человека) Вспомогательные контроли в титровании (титрование анти- IgG/IgM человека) Вспомогательные контроли в титровании (титрование анти- IgG/IgM человека) Вспомогательные контроли в титровании (титрование анти-IgG/IgM человека) Вспомогательные контроли в титровании (титрование анти-IgG/IgM человека) Вспомогательные контроли в титровании (титрование анти-IgG/IgM человека) Вспомогательные контроли в титровании (титрование анти-IgG/IgM человека) Вспомогательные контроли в титровании (титрование анти-IgG/IgM человека) Вспомогательные контроли в титровании (титрование анти-IgG/IgM человека) Вспомогательные контроли в титровании (титрование анти-IgG/IgM человека) Маркер границы эррея Маркер границы эррея Маркер границы эррея Маркер границы эррея Маркер границыэррея Маркер границы эррея Маркер границы эррея Маркер границы эррея Маркер границы эррея Маркер границы эррея Маркер границы эррея Маркер границы эррея Маркер границы эррея Маркер границы эррея Маркер границы эррея Маркер границы эррея |
| 20 |  |
IgMIgG IgM + IgG 1 стадия (n =159) 60,1 % 48,6 % 87,3 % 2 + 3 стадии (n = 201) 55,7 % 88,6 % 97,1 % Чувствительность и специфичность иммуночипа для cеродиагностики ИКБ (клинический материал предоставлен и охарактеризован клиническими базами: МОНИКИ, НИИР РАМН, Центрами санэпиднадзора - г. Ижевск, г.Киров, г.Ярославль, г. С.-Петербург) 96,4% 97,2% Cпецифичность (n = 495) |
| 21 |  |
Сравнительное изучение выявления специфических антител в сывороткахкрови больных ИКБ в различных тест-системах (процент выявления антител, ограниченная выборка клинического материала, n=42) % |
| 22 |  |
Изучение дискордантных образцов в иммуноблоте на наличие антителкласса М Образец Иммуночип (спектр антител) Иммуноблот (количество баллов и спектр антител) 947-2 + VlsE B. afzelii, p41int B. afzelii, p17 B.afzelii - (4 балла) p41int B. Afzelii, p41int B. Garinii 989-3 + OspC B. garinii + (8 баллов) ospc 902-2 + OspC B. garinii, OspC B. afzelii + (8 баллов) ospc 903-1 + VlsE B. garinii, OspC B. garinii - (3 балла) vlse 934-3 + p100 B. afzelii, p41 int B. afzelii, p39 B. afzelii, OspC B. garinii, p17 B. afzelii, p17 B. garinii + (11 баллов) vlse, ospc 945-2 + p41 int B. afzelii, p41 int B. afzelii, OspC B. afzelii, OspC B. garinii - (4 балла) p41 int B.Afzelii, p41 int B. Garinii 1319-2 + p41 int B. afzelii, p41 int B. afzelii, OspC B. afzelii, OspC B. garinii Сомнительный (5 баллов) p41, p41 int B.Afzelii, p41 int B. Garinii |
| 23 |  |
Инфекции передаваемые клещами рода IxodesF.tularensis Rickettsia |
| 24 |  |
Иммуночип для выявления cпектра трепонемоспецифических и реагиновыхантител классов G и M, ассоциированных с сифилисом 2,06 16,1 4,84 3,45 1,56 10,0 7,98 0,86 0,59 0,65 0,67 0,45 10.5 7,34 Tp 47 Tp 17 Tp 47 TmpA Кардиолипин К1 К2 |
| 25 |  |
Результаты изучения чувствительности и специфичности иммуночипа длядиагностики сифилиса Сыворотки Кол-во Кол-во полож. Кол-во отрицат. Кол-во н/о От пациентов с положительной реакцией на сифилис в рефер. Т/с. 600 595 - 5 из панели МБС (полож.) 18 18 - - из панели МБС (отриц.) 8 - 8 - от больных Лайм-боррелиозом 150 - 150 - От больных лептоспирозом 50 - 50 - с высоким содержанием РФ-фактора 20 - 20 - От «здоровых» доноров 880 1 878 1 |
| 26 |  |
Иммуночип для серодиагностики TORCH-инфекций1 иммуночип на комплекс TORCH = 16 ИФА-тест-систем Одновременное выявление антител разных классов при использовании смеси конъюгатов (анти-IgG, - IgM, - IgA), меченых флуорофорами, отличающимися по спектральным характеристикам) Одновременное выявление антител к разным инфекциям на одном стекле |
| 27 |  |
Дизайн одного эррея для серологической диагностики TORCH-инфекцийGRA1 (p24) T.gondii Внутренние контроли (human IgG/IgM) Внутренние контроли (human IgG/IgM) Внутренние контроли (human IgG/IgM) Внутренние контроли (human IgG/IgM) Внутренние контроли (human IgG/IgM) Внутренние контроли (human IgG/IgM) Внутренние контроли (human IgG/IgM) Внутренние контроли (human IgG/IgM) Внутренние контроли (human IgG/IgM) Внутренние контроли (human IgG/IgM) Внутренние контроли (human IgG/IgM) Внутренние контроли (human IgG/IgM) Внутренние контроли (human IgG/IgM) Внутренние контроли (human IgG/IgM) Внутренние контроли (human IgG/IgM) Внутренние контроли (human IgG/IgM) Внутренние контроли (human IgG/IgM) Внутренние контроли (human IgG/IgM) Внутренние контроли (human IgG/IgM) Внутренние контроли (human IgG/IgM) Внутренние контроли (human IgG/IgM) Внутренние контроли (human IgG/IgM) Внутренние контроли (anti - human IgG/IgM) Внутренние контроли (anti - human IgG/IgM) Внутренние контроли (anti - human IgG/IgM) Внутренние контроли (anti - human IgG/IgM) Внутренние контроли (anti - human IgG/IgM) Внутренние контроли (anti - human IgG/IgM) Внутренние контроли (anti - human IgG/IgM) Внутренние контроли (anti - human IgG/IgM) Внутренние контроли (anti - human IgG/IgM) Внутренние контроли (anti - human IgG/IgM) Внутренние контроли (anti - human IgG/IgM) Внутренние контроли (anti - human IgG/IgM) Внутренние контроли (anti - human IgG/IgM) Внутренние контроли (anti - human IgG/IgM) Внутренние контроли (anti - human IgG/IgM) Внутренние контроли (anti - human IgG/IgM) Внутренние контроли (anti - human IgG/IgM) Внутренние контроли (anti - human IgG/IgM) Внутренние контроли (anti - human IgG/IgM) Внутренние контроли (anti - human IgG/IgM) Внутренние контроли (anti - human IgG/IgM) Внутренние контроли (anti - human IgG/IgM) GRA1 (p24) T.gondii GRA7 (p29) T.gondii GRA7 (p29) T.gondii MIC3 T.gondii MIC3 T.gondii SAG 1 (p30) T. gondii SAG 1 (p30) T. gondii E1 Rubella virus E1 Rubella virus E2 Rubella virus core Rubella virus GRA7 (p29) T.gondii GRA7 (p29) T.gondii MIC3 T.gondii MIC3 T.gondii SAG 1 (p30) T. gondii SAG 1 (p30) T. gondii E1 Rubella virus E1 Rubella virus E2 Rubella virus core Rubella virus pp 28 CMV pp 38 CMV pp 38 CMV pp 52 CMV pp 52 CMV pp 65 CMV pp 65 CMV pp 150 CMV pp 150 CMV VP1 B19 Parvovirus VP2 B19 Parvovirus pp 28 CMV pp 38 CMV pp 38 CMV pp 52 CMV pp 52 CMV pp 65 CMV pp 65 CMV pp 150 CMV pp 150 CMV VP1 B19 Parvovirus VP2 B19 Parvovirus gD1 HSV-1 gG1 HSV-1 gG1 HSV-1 gD2 HSV-2 gD2 HSV-2 gG2 HSV-2 gG2 HSV-2 p18 EBV p18 EBV p54 (ENA) EBV EBNA EBV gD1 HSV-1 gG1 HSV-1 gG1 HSV-1 gD2 HSV-2 gD2 HSV-2 gG2 HSV-2 gG2 HSV-2 p18 EBV p18 EBV p54 (ENA) EBV EBNA EBV BSA-Cy5/Cy3 BSA-Cy5/Cy3 BSA-Cy5/Cy3 BSA-Cy5/Cy3 BSA-Cy5/Cy3 BSA-Cy5/Cy3 BSA-Cy5/Cy3 BSA-Cy5/Cy3 BSA-Cy5/Cy3 BSA-Cy5/Cy3 BSA- Cy5/Cy3 BSA- Cy5/Cy3 BSA- Cy5/Cy3 BSA- Cy5/Cy3 BSA- Cy5/Cy3 BSA- Cy5/Cy3 BSA- Cy5/Cy3 BSA- Cy5/Cy3 BSA- Cy5/Cy3 BSA- Cy5/Cy3 BSA- Cy5/Cy3 BSA-Cy5/Cy3 |
| 28 |  |
+Флуоресцентная детекция спектра антител разных классов: IgG и IgM + - - + Канал Cy3 Канал Сy5 конъюгат анти-IgM человека-Сy3 конъюгат анти-IgM человека-Сy3 |
| 29 |  |
Совпадение результатов, полученных в иммуночипе, с данными ИФА притестировании сывороток (всего- 700 шт) Комплекс ToRCH-инфекций Комплекс ToRCH-инфекций % Совпадения % Совпадения По положительным сывороткам По отрицательным сывороткам T.gondii 97,6 97,6 CMV 97,6 100 HSV-1,2 97,6 97,7 Rubella 94,3 97,5 EBV 92,4 95,2 |
| 30 |  |
Определение значимых маркеров к ВИЧ 1 и 2 типов, ВГС, сифилисуgp120, gp160, gp41, pol, gag, env(ВИЧ2), AТ p24, сore, NS3, NS4, NS5, Tp47, Tp17, Tp15, TmpA, IgG, анти-IgG, буфер Канал учета специфической реакции – Сy5 Канал внутреннего контроля - FITC |
| 31 |  |
Оценка чувствительности иммуночипа «ВИЧ-ВГС-сифилис» (n = 1290образцов) 99.1 98.0 98.7 Исследуемые образцы Кол-во Кол-во ВИЧ-положительных образцов Кол-во анти-ВГС-положительных образцов Кол-во образцов содержащих, антитела к сифилису - От больных сифилисом 385 41 35 380 (5 – н/о) - Осо вич-1(+) 16 16 0 0 - Осо вич-2 (+) 8 8 0 0 - Осо вгс (№№1-16 +) 16 0 16 0 - от больных ВГС 400 56 392 (8 – н/о) 22 - от ВИЧ-инфицирован-ных 465 461 (4 – н/о) 188 45 Чувствитель-ность, % |
| 32 |  |
Оценка специфичности иммуночипа «ВИЧ-ВГС-сифилис» (n = 678 образцов)99,4 99.3 99.1 Исследуемые образцы Кол-во Кол-во ВИЧ-положительных образцов Кол-во анти-ВГС-положительных образцов Кол-во образцов содержащих, антитела к сифилису - От практически здоровых доноров 400 1 2 2 - Осо вич ( - ) 20 0 0 0 - Осо вгс (№№ 17-24 - ) 8 0 0 0 - От лиц с аутоиммунными заболеваниями 50 1 2 1 - От инфекционных больных другой этиологии 200 2 1 3 Специфичность, % |
| 33 |  |
Иммуночип для детекции ООИ ( B.anthracis, Y.pestis)Один эррей (ФЦП «Национальная система химической и биологической безопасности РФ“) Для B.Anthracis Для детекции Y.Pestis Аb SA26 Ab IgG F1 К - К - BSA-Cy5 |
| 34 |  |
Примеры флуоресцентных паттерновАналитическая чувствительность B. anthracis Y.pestis 10 7 cells/ml 10 6 cells/ml 10 5 cells/ml 10 4 cells/ml 10 3 cells/ml 10 7 cells/ml 10 6 cells/ml 10 5 cells/ml 10 4 cells/ml 10 3 cells/ml |
| 35 |  |
ДНК-чип для детекции B.anthracis, Y.pestis, F.tularensisBacilus anthracis Francisella tularensis Yersinia pestis pagA CapA capB IglBC FopA RD1 mVin Printing buffer pla caf1 caf1 caf2 Ypo 0394 Ypo 0397 |
| 36 |  |
Схема анализа с помощью ДНК-чипаВыделение ДНК из материала ПЦР-амплификация последовательность промотора T7-RNA полимеразы включена в структуру обратных праймеров Транскрипция (15-30 мин) Гибридизация на DНК-чипе (30 мин) Детекция положительных сигналов на чипе с использованием стрепатавидин-Cy5 (15-20 мин) Сканирование и анализ результатов Пробо- подготовка On-chip анализ |
| 37 |  |
Примеры флуоресцентных паттернов после гибридизации на ДНК-чипеМатериал Праймеры B.a.+ Y.p + F.t. mix B.a. mix Y.p. mix F.t. mix Штамм B. anthracis Y.Pestis антиген F.Tularensis штамм |
| 38 |  |
Наши планы Регистрация тест-систем для серодиагностики TORCH, cифилисатрансфузионных инфекций, боррелиоза. Разработка программы для обсчета результатов и формирования клинического отчета, удобного для врача-лаборанта. Организация производства биочипов. Взаимодействие с клиническими базами. 5 …….. |
| 39 |  |
Спасибо за внимание |
| «Иммуночипы – новый формат тест-систем для серологической диагностики инфекционных заболеваний» | ||
